گروه 1:
مقاومت تهران 1-1 فولاد یزد (۱۹/۱۰/۱۳۸۸)
ذوبآهن اردبیل 1-0 آریا سپاهان قم (۱۹/۱۰/۱۳۸۸)
گلچین رباط کریم 2-2 پالایش گاز ایلام (۱۹/۱۰/۱۳۸۸)
ماشینسازی تبریز 2-1 سپیدرود رشت (۱۹/۱۰/۱۳۸۸)
(هپکو اراک: استراحت)
گروه 2:
نیروی زمینی تهران 2-2 شهرداری یاسوج (۱۹/۱۰/۱۳۸۸)
پرسپولیس گناوه 2-4 نوژن مازندران (۱۹/۱۰/۱۳۸۸)
نفت و گاز گچساران 4-1 پرسپولیس بجنورد (۱۹/۱۰/۱۳۸۸)
نفت اهواز 3-0 پرسپولیس زاهدان (۱۹/۱۰/۱۳۸۸)
(شهرداری لنگرود: استراحت)
گروه 3:
هما تهران 2-0 شهرداری ماهشهر (۱۹/۱۰/۱۳۸۸)
آرد گلستان 2-2 سایپا شمال مازندران (۱۹/۱۰/۱۳۸۸)
داماش تهران 2-1 استقلال قزوین (۱۹/۱۰/۱۳۸۸)
صنعت نفت نوین آبادان 3-2 پرسپولیس برازجان (۱۹/۱۰/۱۳۸۸)
(گاز سرخس: استراحت)
گروه 4:
استقلال جنوب تهران 0-2 شهرداری زنجان (۱۹/۱۰/۱۳۸۸)
شهرداری همدان 3-1 مقاومت مازندران (۱۹/۱۰/۱۳۸۸)
آرمین تهران 1-0 افتخار خراسان جنوبی (۱۹/۱۰/۱۳۸۸)
شهرداری شهرکرد 2-1 خیبر بوژان لرستان (۱۹/۱۰/۱۳۸۸)
(شهرداری انزلی: استراحت)